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如何进行血清的一般制备

血清的一般制备方法

  • 回答3

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    邢学法 主治医师

    冠县辛集中心卫生院

    一级

    外科

    血清制备通常包括采血、离心、分离血清等步骤,以及在操作中要注意无菌操作、选择合适的抗凝剂、控制温度和时间等。 1.采血:采血前要对采血部位进行严格消毒,可选择静脉采血。常用的采血部位有肘正中静脉、股静脉等。 2.抗凝剂选择:常用的抗凝剂有肝素、乙二胺四乙酸(EDTA)等。肝素抗凝作用迅速,但用量不易掌握;EDTA 对血细胞形态影响小。 3.离心:将采集的血液放入离心机中离心。离心速度和时间要根据血液量和离心机性能确定。 4.无菌操作:整个过程要在无菌环境下进行,防止细菌污染。 5.温度和时间控制:采血后应尽快处理,避免血液变质。离心时的温度也要适宜,一般在 4℃左右。 血清制备是一项需要严格操作的工作,每个环节都关系到血清的质量和后续实验的准确性。在制备过程中,要严格遵守操作规程,确保血清的质量和安全性。

    2024-12-20 03:43
  • 回答2

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    肖起涛 主治医师

    家庭医生在线合作医院

    其他

    内科

    血清是血液离体自然凝固后分离出来的液体.制法:人血管中抽出的血液,直接放入空试管中,不做任何抗凝处理,血液逐渐发生凝固,数小时后血块慢慢缩小并释放出黄色的液体称之为血清 免疫血清的制备 一,原理  具有免疫原性的抗原可刺激机体相应B细胞增殖,分化形成浆细胞并分泌特异性抗体.由于抗原分子表面的不同决定簇为不同特异性的B细胞克隆所识别,因此由某一抗原刺激机体后产生的抗体,实际上为针对该抗原分子表面不同决定簇的抗体混合物(即多克隆抗体).另外,抗体的产生具有回忆应答的规律性,牨m现为初次免疫注射与再次免疫注射后的抗体应答特点截然不同.这是由于记忆性B细胞参与再次应答所致.  二,免疫方法  根据抗原的性质不同而异.下面以制备家兔抗人IgG免疫血清为例作具体说明.  1. 用剪刀剪去家兔两后脚掌的部分兔毛,以酒精及碘酒消毒皮肤;  2. 第一次免疫:用2ml注射器吸取弗氏完全佐剂(FCA)乳化的抗原(人IgG)下称FCA-IgG)液1ml,每侧脚掌皮下各注入0.5ml.  3. 第二次免疫:间隔10-14天后,于两侧窝及鼠蹊部肿大的淋巴结内注入FCA-IgG,每个淋巴结注0.1ml,其余注入淋巴结附近皮下共1ml.如淋巴结未肿大或肿大不明显时,直接注入两侧 窝及鼠蹊部皮下.  4. 间隔7-10天后,从耳静脉采血0.5~1.0ml,分离血清,以双相琼脂扩散试验测定免疫血清的抗体效价(即试血).效价至少应达到1∶16以上时才能放血.  5. 若效价未达到要求,可用不加佐剂的抗原液(人IgG)耳静脉内注射免疫.即于1周内注射3次,分别为0.1,0.3,0.5ml.间隔1周再试血.如效价达到要求应立即放血.另外,也可在第2次免疫后,以弗氏不完全佐剂(FIA)乳化的抗原(人IgG)(简称FIA-IgG)再免疫1-2次.注射部位,剂量和间隔均同第2次,再试血测抗体效价,如效价达到要求立即放血.  三,放血  (一) 心脏采用血法  1. 家兔仰面,四肢缚于动物固定架上(或由助手抓住四肢固定);  2. 剪去左胸部兔毛,消毒皮肤;  3. 用左姆指摸到胸骨剑突处,食指及中指放在右胸处轻轻向左推心脏,并使心脏固定于左胸侧位置.然后,以左拇指触摸心脏搏动最强的部位;  4. 用50ml注射器(连接16号针头),倾针45°角度,对准心搏最强处刺入心脏抽血致死;  5. 将抽取的血液立即注入无菌三角烧瓶中,待凝固后分离血清.  (二) 颈动脉放血法  1. 家兔仰卧同上固定.头部略放低以暴露颈部.剃毛及消毒皮肤;  2. 沿颈部中线切开皮肤约10cm,分离皮下组织,直至暴露出气管两侧的胸锁乳突肌;  3. 分离胸锁乳突肌与气管间的颈三角区疏松组织,暴露出颈总动脉后使之游离;  4. 于动脉下套入两根黑丝线,分别置于远心及近心端.结扎远心端的丝线.近心端的动脉用血管夹夹住;  5. 用尖头小剪刀在两根丝线间的动脉璧上剪一小口,插入塑料放血管.再将近心端的丝线结扎固定于放血管上,以防放血管滑脱;  6. 松开血管夹,使血液流入灭菌三角烧瓶中.一般一只家兔可放血80~100ml.  四,分离血清  将三角烧瓶的血置37℃温箱1小时,再置4℃冰箱内3~4小时.待血液凝固血块收缩后,用毛细滴管吸取血清.于3000rpm离心15分钟,取上清加入防腐剂(0.01%硫柳汞或0.02%叠氮钠,最终浓度),分装后置4℃冰箱中保存备用.  五,结果鉴定  以双相琼脂扩散试验测定所获免疫血清的抗体效价,并用琼指免疫电泳鉴定免疫血清中抗体的质量,应产生单一的沉淀弧线.鉴定方法的具体步骤参见有关部分.

    2015-11-15 15:19
  • 回答1

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    张俊相 住院医师

    威县妇女儿童医院

    二级甲等

    外科

    血清的一般制备方法?首先要明确血清定义,并与血浆相区分(1)[serum]∶血液凝固后,在血浆中除去纤维蛋白分离出的淡黄色透明液体,尤指含有特异性免疫体(如抗毒素或凝集素)的免疫血清(抗菌素血清)(2)[bloodserum]∶纤维蛋白已被除去(如通过血凝或去纤维蛋白法)的血浆血清是指血液凝固析出的淡黄色透明液体.如将血液自血管内抽出,放入试管中,不加抗凝剂,则凝血反应被激活,血液迅速凝固,形成胶冻.凝血块收缩,其周围所析出之淡黄色透明液体即为血清,也可于凝血后经离心取得.在凝血过程中,纤维蛋白原转变成纤维蛋白块,所以血清中无纤维蛋白原,这一点是与血浆最大的区别.而在凝血反应中,血小板释放出许多物质,各凝血因子也都发生了变化.这些成分都留在血清中并继续发生变化,如凝血酶原变成凝血酶,并随血清存放时间逐渐减少以至消失.这些也都是与血浆区别之处.但大量未参加凝血反应的物质则与血浆基本相同.为避免抗凝剂的干扰,血液中许多化学成分的分析,都以血清为样品.

    2015-11-15 12:43
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