凝血酶ph
2016-01-13 01:38
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我用了amersham的凝血酶，protocal上说16到25度20hr后，每mg融合蛋白用10U的凝血酶切割可以得到90%的切割效率，可是我用pH7.5的PBS溶解融合蛋白后，每mg蛋白加入凝血酶6U、12U、24U，分别在室温和37度温育，8小时、16小时、24小时分别取样，发现只有37度下24小时24U的凝血酶切了不到10%，而且出现了微弱的降解条带，其他情况下融合蛋白都没有什么变化，不知要怎样优化酶切条件呢？
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回答2
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轩存旺 医师
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全科
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应该用凝血酶酶切缓冲液溶解融合蛋白，凝血酶最适pH值为8.4左右;凝血酶量加少了,将凝血酶加倍试试
2016-01-13 10:20
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回答1
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肖起涛 主治医师
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一般不会出现这种问题，做这个酶，1×pbs（ph＝7。3），也是用每毫克加了10U，20度20小时，酶切达80－90％，条件基本相同。而且这个酶也很贵呀，500U要500元。所以考虑1。你的酶有没有问题，时间？是不是每次都拿出来化的，我是将它一起融解分装后冻存，每次用的时候取一支。
2016-01-13 02:57
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