组氨酸标签密码子
我要表达的蛋白序列需要加一个组氨酸标签,方便后面的分离纯化,请问我该怎么加?分离纯化后对标签进行切割常用的酶切位点又是怎样的呢?
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组氨酸标签是一种融合标签,它可与多种蛋白形成融合蛋白,基于组氨酸的咪唑环与金属离子(如镍离子)起化学作用而生成螯合的原理,可以利用标签纯化融合蛋白。抗体具有高灵敏度,高特异性和高亲和力。随着生物技术的发展,科研人员可以通过DNA重组技术,构建包含目的基因以及表位标记的融合蛋白,进而通过特异性标签抗体对其鉴定与纯化,以达到研究的需求。
2016-02-26 19:30
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我目前的经验来看多数的都设计有蛋白酶切位点,而段的都直接加入终止密码子不要了。标签也无需自己加,你可以选择两端都带标签的,上游使用就不会在段有标签了。下游引物不要加终止密码子,同时引入蛋白酶切点。什么酶看你自己选择了。有4度切的就不错,都行。酶切的也多少有些差别。自己选择吧。
2016-02-26 03:06
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