甲真菌病的诊断方法是什么？

甲真菌病是临床常见病，目前已有报道采用组织病理学方法对其真菌学检 查进行补充[1～3]提高了诊断率。但在实际工作中，组织病理 学方法较为繁琐，为寻找一种更便捷有效的诊断方法，我们进行了甲真菌病的扫描电镜诊断研究。

一、病例和方法

（一）病例：我科门诊拟诊为甲真菌病的病例25例，其中男14例，女11例；年龄16～58岁，平 均34.5岁；病程1个月至8年，平均2.6年。25例的病甲均具有甲板增厚、角质松解、色泽 改变、表面不平等特征。2例无全身性和手足甲病的年轻人作为正常人对照。

（二）取材方法：

1、常规方法刮取甲屑做真菌镜检和培养。

2、采用远端修剪法（3例病甲和正常手、足甲各1例）或全甲拔除术（22例病甲）在消毒后以无菌 器械剪下或拔下甲组织块，再以无菌剪将其纵行分为两块，一半置于10%甲醛溶液中留做病 理检查，另一半再剪为3mm×3mm大小的三块放入无菌袋中留做扫描电镜观察。

（三）检查方法：

1、KOH直接镜检法：刮取甲屑后按常规方法操作。

2、真菌培养法：甲屑分别接种于含放线菌酮的沙堡培养基和普通沙堡培养基各2～3管，25℃ 孵育20天后鉴定菌种。

3、组织病理学PAS染色法：甲组织块在10%甲醛溶液中固定24小时，再应用10%硝酸水溶液软 化1周，石蜡包埋后切6μm厚的切片5至6张，PAS染色后封片光镜下读片。

4、扫描电镜法：每例甲标本一式3份，按内表面、外表面、断面顺序固定于样品台上，放入E ikoj IB-Ⅱ型离子溅射仪中喷镀金膜后，放入日立S-520扫描电镜进行观察。此方法诊断 甲真菌病的标准是：在甲断面上见到真菌菌丝或孢子，或者在甲板内、外表面见到真菌菌丝 向内穿入。

三、结果

（一）KOH直接镜检法：25例中20例阳性（80%）。

（二）真菌培养法：25例中18例阳性（72%），其中皮肤癣菌属8例（红色毛癣菌7例，絮状表皮癣 菌1例），念珠菌属4例，霉菌属4例（曲霉2例，待鉴定2例），混合感染2例。

（三）组织病理学PAS染色法：25例病甲均见有不同程度的角质增厚、松解和甲板空腔、裂 隙，其中23例（92%）于甲组织内检出PAS阳性的真菌成分。

（四）扫描电镜法：25例病甲的内、外表面和断面均见有不同程度的破坏，表现为甲板 不平、沟、嵴、裂隙、孔洞等，而2例正常甲的各个甲面则平整均一。有24例病甲（96% ）在断面和（或）内、外表面上检出真菌成分（附表），从而诊断甲真菌病，仅1例病甲在三个甲 面上均未检出真菌成分，此例的KOH直接镜检、真菌培养和组织病理学检查均阴性，故提示 很可能不是甲真菌病。2例正常甲的各个甲面均未检出真菌成分。从检出真菌的形态来看， 有些是细长分节规则排列的菌丝，有些则是大量聚集的孢子，据此可以大致粗略 区分致病真菌的种类，丝状真菌还是酵母菌。