胰岛素受体结合率测定
激素和受体之间的反应快速而可逆,服从质量作用定律。业已发现,肝细胞膜上存在两种结合胰岛素受体:解离常数为0.5×10ˉ10mol/L时,每个细胞有3000个胰岛素受体;解离常数为3×10ˉ9mol/L时,每个细胞有3000个胰岛素受体。
数量少而对胰岛素具有高亲和性的受体是功能性受体,数量多而亲和性低的受体不起多大作用。胰岛素的生理效应取决于受体结合率。当受体达到使受体全部饱和浓度时,结合率最高,生理效应也最大。绝大多数Ⅱ型糖尿病人是在成年发病的,他们的胰岛素可分泌正常或超正常量的胰岛素。
这些病人主要是由于脂肪肌肉细胞对胰岛素敏感性降低,即胰岛素抵抗。细胞膜上有特异性受体部位与胰岛素及胰高糖素相互作用,以调节细胞的代谢。糖尿病或具胰岛素抵抗的肥胖患者有多种细胞对胰岛素结合能力比正常人要低的多,而控制饮食或服药后,结合能力可以恢复到接近正常。利用胰岛素结合能力降低特点,可以识别某些易于发生糖尿病的人。
1、胰岛素受体的测定我们采用受体放射分析法(RRA)测定全血细胞胰岛素受体。
(1)抽取空腹静脉血注入含有肝素抗凝的玻璃试管中,保证无凝血块、勿溶血。离心分离血浆与血细胞,将血细胞用生理盐水洗涤2次,保温液洗涤1次,计数血细胞个数,应不少于4.4×10 6/&muL。
(2)将细胞混悬液与不同浓度胰岛素及1 25I-胰岛素共同反应24小时,分离结合(B)与游离(F),经r-计数器测定得出一条结合曲线拐点上段为高亲和力低结合容量部分,下段为低亲和力高结合容量部分。通过线性回归计算出受体亲和常数k1、k2,进而计算出受体结合位点结合容量r1、r2。
(3)正常参考值高亲和力低结合容量胰岛素受体:k1=(1.03~5.21)×10 9LMˉ1r1=40-80个/个细胞
低亲和力高结合容量胰岛素受体:k2=(1.24~4.86)×10 7LMˉ1r2=1500-3000个/个细胞
(责任编辑:家医编辑 )
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